實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>通過(guò)對(duì)裸鼠腫瘤組織樣品的實(shí)驗(yàn)研磨,可便于后續(xù)對(duì)樣品組織中蛋白的提取;再通過(guò)外泌體干預(yù)的荷瘤鼠模型中驗(yàn)證,腫瘤的基因表達(dá)情況是否與蛋白測(cè)序結(jié)果一致。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:冷凍組織研磨儀 JXFSTPRP-CLN-48
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理實(shí)驗(yàn)研磨過(guò)程:
1.將小鼠通過(guò)注射麻醉劑慢慢失去知覺(jué)后,對(duì)小鼠進(jìn)行解剖取小鼠身上的腫瘤塊?! ?/p>
2.取下腫瘤塊后在將腫瘤塊剪切成綠豆大小的塊狀,可先放入液氮或者-80℃的冰箱中方便后期研磨。
3.冷凍研磨儀開(kāi)機(jī),先將儀器制冷功能打開(kāi),溫度設(shè)置成-20℃,確保樣品在研磨時(shí)蛋白不會(huì)發(fā)生裂解。
4.研磨儀預(yù)設(shè)溫度達(dá)到后,將剛剛?cè)『眉羟泻蟮臉悠贩湃胙心ス苤?,每個(gè)研磨管盡量放100mg左右,再往研磨管中加入4顆研磨珠,再加入蛋白提取液蓋上研磨管蓋,進(jìn)行濕磨?! ?/p>
5.將研磨管放入適配器中,適配器再固定到研磨儀上?! ?/p>
6.設(shè)置研磨儀參數(shù),設(shè)置好研磨頻率和時(shí)間,研磨次數(shù)2次,研磨中斷時(shí)間15s,經(jīng)過(guò)研磨后,再進(jìn)行蛋白的提取。
實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng):
1.研磨管放到適配器上,一定要注意研磨管的平面配平,否則會(huì)損壞研磨儀的寶塔?!?/p>
2.適配器在放到研磨儀寶塔上時(shí),固定螺母一定要固定緊,否則既會(huì)損壞研磨儀寶塔,還會(huì)對(duì)適配器底部造成損壞?! ?/p>
裸鼠腫瘤組織樣品的前處理實(shí)驗(yàn)研磨效果圖:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:樣品經(jīng)研磨后提取的蛋白含量充足。
冷凍組織研磨儀能在非常短的時(shí)間內(nèi)將土壤、植物和動(dòng)物的組織,器官等樣品完成研磨、粉碎。隨著近代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,特別是腫瘤學(xué)和免疫學(xué)的需要,動(dòng)物組織的研磨已經(jīng)成為了實(shí)驗(yàn)室不可缺少的一個(gè)環(huán)節(jié)。JXFSTPRP-CLN-48低溫研磨樣品,實(shí)現(xiàn)無(wú)交叉污染的同時(shí),低溫研磨樣品能夠有效抑制核酸降解、保留蛋白質(zhì)活性。是實(shí)驗(yàn)室樣品前處理的好幫手。